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维生素是必须的营养素,分为水溶性维生素和脂溶性维生素。此次,使用反相色谱柱对9种水溶性维生素成分进行了同时分析,以DAD进行了检测。 通过使用DAD,检测出的成分可以通过吸收光谱来进行鉴定,因此,在分析像食品这类杂质成分较多的样品时尤为有效。
由于维生素C和异抗坏血酸不稳定,制备样品时或者放置一段时间后很容易降解,因此较难获得其线性和重现性,需要引起注意。因此,请将本分析条件用于主要以定性为目的的实验。需要定量时,推荐对各维生素分别进行试验。

水溶性维生素的同时分析

标准样品

浓度及结构式

成分名

  • 维生素B1(硫胺素)*
  • 维生素B6(吡哆醇)*
  • 烟酰胺
  • 维生素B12(氰钴胺)
  • 抗坏血酸葡萄糖苷
  • 维生素C(抗坏血酸)
  • 异抗坏血酸
  • 维生素B2(核黄素)
  • 烟酸
*:
使用其盐酸盐
浓度各为50 mg/L
标准原液/标准溶液以流动相稀释

分析条件

色谱柱 HITACHI LaChrom C18-PM (5 µm) (4.6 mmI.D. x 250 mm)
流动相 磷酸盐缓冲液(pH 5.2)/CH3CN = 90/10(v/v)(含四丁基氢氧化铵)
流速 0.8 mL/min
柱温 40°C
检测波长 DAD 260 nm
进样量 10 µL

本分析中使用的流动相为离子对试剂(四丁基氢氧化铵)。由于离子对试剂很难从色谱柱中完全除去,因此推荐将使用过的色谱柱作为维生素分析专用。

装置构成

5110 泵
5210 自动进样器
5310 柱温箱
5430 二极管阵列检测器
数据处理系统

标准样品测定例


高线及提取色谱图


水溶性维生素的光谱图

线性


[VB6的标准曲线]

各成分标准曲线的范围均为0.1 - 50 mg/L, r2 = 0.995以上,线性关系良好。
但是,维生素C,异抗坏血酸,维生素B12较难得到良好的线性,需要引起注意。

样品分析例(1)

营养剂


营养剂的色谱图


[检出的各峰与标准样品的光谱图]

营养剂的前处理方法

称取2 mg样品,以流动相定容至10 mL,以0.45 µm 微孔滤膜过滤

样品分析例(2)

功能饮料


功能饮料的色谱图与等高线图


[检出的各峰与标准样品的光谱图]

功能饮料的前处理方法

以流动相稀释10倍,以0.45 µm 微孔滤膜过滤

结果:

营养剂与功能饮料都在10.7分钟的时候检测出了峰,将其鉴定为与其保留时间接近的异抗坏血酸尚有疑虑,因此对其光谱进行了确认,得知是其他物质。
如上,对于杂质成分较多的食品等样品来说,能够得到光谱信息的DAD非常有用。

注意:
本资料所示数据仅为测定例用数据而非可保证仪器性能的数据。
本仪器只是研究用仪器,而不是诊断,治疗或预防人或动物疾病的医疗仪器。

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