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荧光分光光度计之光谱精确测定

相对于吸收光谱法可以测定照射光的减少,荧光分析法则因为可以观察到发光,因此,照射到的光与测定到的光的波长是不同的。
与吸收光谱法相比,荧光分析法具有检测灵敏度更高(在低浓度条件下检测),获取信息更多(可获取激发光谱和荧光光谱)的优势。
然而,荧光光度计光学部件(如灯等)所特有的波长特性可能会造成不同设备之间的检测差异,另外由于光的散射效应,多重光(如次要光等)可能会干扰检测。
我们在此向您介绍一种校正(减少)设备检测差异的一种方法和一种消除光散射的方法。

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有效利用滤光器组件

在表面光度测定中,由于光的散射效应,多重光(如次要光等)可能会干扰检测。
截止滤光器可有效抑制多重光。根据斯托克斯原理,与激发光相比,荧光可以通过更长波长测定。我们的截止滤光器正是利用了这一原理。
我们将通过分析水杨酸钠(粉末)获得的数据来说明截止滤光器的效果。使用滤光器(UV35)可消除光散射,把光引向探测器,以控制次要光的产生。

滤光器组件
滤光器组件
使用過濾器集合的作用

右图数据取自三维数据。从这二维数据上看,第二条光线正在被消除。

第2個日期使用過濾器集合

有效使用光谱校正工具组件

我们在此向您介绍光谱校正方法,以获得精确的光谱。荧光光度计的每个光源灯或探测器都有其各自的波长特性。
由于检测到的光谱数据通常带有上述仪器的波长特性,要获得真实的光谱,必须进行校正。我们在此向您展示一套光谱校正工具组件的检测效果。这套组件通常包括一份罗丹明B浓缩液和一个副标准光源。
以下是通过分析水杨酸钠(粉末)获得的数据进行光谱校正后的效果。三维数据随光谱校正的有无发生变化,直观地说明了波长特性效果。

光谱校正工具组件
光谱校正工具组件
影響使用光譜更正成套工具
第2數據使用光譜更正成套工具

以上是文献数据和测定数据比较图。我们比较了NIST SRM 936a硫酸奎宁有光谱校正和没有光谱校正情况下的波长验证值。通过文献或其它仪器和光谱验证值的比较,同样可以说明光谱校正的效果。

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