HPLC Chromaster（クロムマスター）
-アミノ酸分析の紹介（Chromaster NINポストカラム標準分析法）-

自然界に存在するアミノ酸は数百種類あることが知られていますが、タンパク質やペプチドを構成するアミノ酸は約20種類です。このアミノ酸を対象とした分析法を日立ハイテクでは、「標準分析法」と呼んでいます。それに対し遊離アミノ酸約40成分を対象とした分析法を「生体液分析法」と呼んでいます。
またアミノ酸はUV吸収が弱いため、通常は誘導体化して測定します。カラム溶出後反応試薬を混合するポストカラム法の誘導体化試薬には、ニンヒドリン（NIN＊1）とオルトフタルアルデヒド（OPA＊2）があり、それぞれ異なった特徴があります。
今回は、タンパク質加水分解アミノ酸を対象とし、ニンヒドリン試薬を用いたポストカラム法を紹介いたします。この試薬は安定で、寿命が長いことが特長です。溶離液と反応液は、市販キットを使用できます。また再現性も良好でルーチン分析に向いています。検出は、これまで570 nmで行っていましたが、5420 UV-VIS検出器の2波長測定機能を用い440 nmを同時に測定することでPro（プロリン）の感度向上を図りました。

*1 ＊NIN：ニンヒドリン（ninhydrin）

*2 OPA：オルトフタルアルデヒド（o-phthalaldehyde）

アミノ酸分析法の種類と特徴：

アミノ酸分析システム（NINポストカラム法）

アミノ酸標準試料測定例

No.	各ピークの成分名		No.	各ピークの成分名
1	ASP	Aspartic acid［アスパラギン酸］	10	Met	Methionine［メチオニン］
1	ASP	Aspartic acid［アスパラギン酸］	10	Met	Methionine［メチオニン］
2	Thr	Threonine［スレオニン］	11	Ile	Isoleucine［イソロイシン］
3	Ser	Serine［セリン］	12	Leu	Leucine［ロイシン］
4	Glu	Glutamic acid ［グルタミン酸］	13	Tyr	Tyrosine［チロシン］
5	Pro	Proline［プロリン］	14	Phe	Phenylalanine［フェニルアラニン］
6	Gly	Glycine［グリシン］	15	Lys	Lysine ［リジン］
7	Ala	Alanine［アラニン］	16	His	Histidine［ヒスチジン］
8	Cys	Cystine［シスチン］	17	Arg	Arginine［アルギニン］
9	Val	Valine［バリン］

標準分析法測定条件：

カラム	#2619PH 4.0 mm I.D. × 150 mm
アンモニアフィルタカラム	#2650L 4.0 mm I.D. × 120 mm
ガードカラム	#2619 4.0 mm I.D. × 5 mm
溶離液	MCI緩衝液L-8500 PH-Kit^＊（PH-1、PH-3、PH-4、PH-RG）
流量	0.4 mL/min
カラム温度	57°
反応液	ニンヒドリン試液ワコーアミノ酸自動分析装置用キット（識別記号：日立用）^＊（R1/R2＝50/50）
反応液流量	0.3 mL/min
反応温度	130°
検出波長	VIS 440nm、570 nm（2波長同時測定）
注入量	20 µL