HPLC Chromaster（クロムマスター）
-高感度DADによる純度試験（テオフィリン）-
日本薬局方は「医薬品の性状および品質などを定めた国定の医薬品規格書」で、通則、生薬総則、製剤総則、一般試験法および医薬品各条ほかから構成されています。一般試験法の中には試薬・試液の項目があり、それぞれの試験法が規定されています。
ここでは第十六改正日本薬局方の一般試験法、試薬・試液に収載されているテオフィリンを取り上げました。純度試験（類縁物質）はHPLCUVでおこないます。まず規定された試験条件に基づきシステムの適合性を確認し、その後類縁物質の確認をおこないました。類縁物質の確認には、微小なピークを正確に把握する必要があるため、検出器の性能が重要なファクターとなります。日立高速液体クロマトグラフChromaster 5430 DADは低ノイズ・低ドリフトを実現し、高感度測定が可能です。
なお今回は、一般試薬のテオフィリンを用いました。
システム適合性の確認
| カラム | Inertsil® ODS-3 （5 µm） 6.0 mm I.D.×150 mm （ジーエルサイエンス社製） |
| 溶離液 | 1％酢酸/メタノール＝4/1（v/v） |
| 流量 | 1.0 mL/min |
| カラム温度 | 40℃ |
| 検出波長 | DAD 220～400 nm（270 nm） |
| 注入量 | 20 µL |
*テオフィリンの保持時間が約10分になるように流量を調整する。
システム適合性：
第十六改正日本薬局方では、純度試験（類縁物質）のシステム適合性として、「検出の確認」「システムの性能」「システムの再現性」が定められています。以下に規定値と今回の測定結果をまとめました。いずれの項目も、この要求を満たす結果が得られました。
| 項目 | システム適合性 規定値 |
測定結果 | |
| 検出の確認 | （0.5 mg/Lピーク面積値/2.5 mg/L ピーク面積値）×100（％） |
15～25 | 20.0 |
| システムの性能 | 理論段数（2.5 mg/L） | 3000以上 | 11592 |
| シンメトリー係数（2.5 mg/L） | 1.5以下 | 1.06 | |
| システムの再現性 | ピーク面積の相対標準偏差 （n＝6）（2.5mg/L） |
3.0％以下 | 0.099％ |
純度試験（類縁物質の確認）
| カラム | Inertsil® ODS-3 （5 µm） 6.0 mm I.D.×150 mm （ジーエルサイエンス社製） |
| 溶離液 | 1％ 酢酸/メタノール＝4/1（v/v） |
| 流量 | 1.0 mL/min |
| カラム温度 | 40℃ |
| 検出波長 | DAD 220～400 nm（270 nm） |
| 注入量 | 20 µL |
*テオフィリンの保持時間が約10分になるように流量を調整する。
テオフィリン以外に複数の微小なピークが確認されました。これら微小ピークの面積値は、テオフィリンのピーク面積値に対して、約0.001％相当でした。主要成分と極微量成分の同時分析が可能であることがわかります。
類縁物質の確認：
第十六改正日本薬局方のテオフィリン試薬の純度試験（類縁物質）は、濃度の異なる2種類のデータから結果を求めるよう定められています。低濃度溶液（標準溶液：2.5 mg/L）中のテオフィリンピーク面積値と、高濃度溶液（試料溶液：500 mg/L）中のテオフィリン以外のピーク面積合計値を比較して評価します。その結果、この要求を満たす数値が得られました。
第十六改正日本薬局方のテオフィリン試薬の純度試験（類縁物質）は、濃度の異なる2種類のデータから結果を求めるよう定められています。低濃度溶液（標準溶液：2.5 mg/L）中のテオフィリンピーク面積値と、高濃度溶液（試料溶液：500 mg/L）中のテオフィリン以外のピーク面積合計値を比較して評価します。その結果、この要求を満たす数値が得られました。
| 項目 | 規定値 | 測定結果 |
| 類縁物質の確認 | （1）標準溶液（2.5 mg/L）のテオフィリンのピーク面積値 ＞ （2）試料溶液（500 mg/L）のテオフィリン以外のピーク面積合計値 （ただし面積値測定範囲は、テオフィリンの保持時間の約3倍） |
○ （（1）162037 ＞ （2）1092） |
注意：本掲載データは測定例を示すもので、数値を保証するものではありません。
本製品は研究用です。診断用ではありません。
