HPLC Chromaster（クロムマスター）
-アミノ酸分析の紹介（Chromaster OPAポストカラム標準分析法）-

自然界に存在するアミノ酸は数百種類あることが知られていますが、タンパク質やペプチドを構成するアミノ酸は約20種類です。このアミノ酸を対象とした分析法を日立ハイテクでは、「標準分析法」と呼んでいます。それに対し遊離アミノ酸約40成分を対象とした分析法を「生体液分析法」と呼んでいます。
またアミノ酸はUV吸収が弱いため、通常は誘導体化して測定します。カラム溶出後反応試薬を混合するポストカラム法の誘導体化試薬には、ニンヒドリン（NIN*1）とオルトフタルアルデヒド（OPA*2）があり、それぞれ異なった特徴があります。
今回は、タンパク質加水分解アミノ酸を対象とし、OPA試薬を用いたポストカラム法を紹介いたします。OPAは蛍光誘導体化試薬で、感度が高いことが特長です。その半面、試薬の寿命が短く、使用する水の純度にも気を配る必要があります。

*1 NIN：ニンヒドリン（ninhydrin）

*2 OPA：オルトフタルアルデヒド（o-phthalaldehyde）

アミノ酸分析法の種類と特徴：

アミノ酸分析システム（OPAポストカラム法）

アミノ酸標準試料測定例

No.	各ピークの成分名		No.	各ピークの成分名
1	Asp	Aspartic acid［アスパラギン酸］	10	Met	Methionine［メチオニン］
2	Thr	Threonine［スレオニン］	11	Ile	Isoleucine［イソロイシン］
3	Ser	Serine［セリン］	12	Leu	Leucine［ロイシン］
4	Glu	Glutamic acid ［グルタミン酸］	13	Tyr	Tyrosine［チロシン］
5	Pro	Proline［プロリン］	14	Phe	Phenylalanine［フェニルアラニン］
6	Gly	Glycine［グリシン］	15	Lys	Lysine ［リジン］
7	Ala	Alanine［アラニン］	16	His	Histidine［ヒスチジン］
8	Cys	Cystine［シスチン］	17	Arg	Arginine［アルギニン］
9	Val	Valine［バリン］

標準分析法測定条件：

カラム	#2619PH 4.0 mm I.D. × 150 mm
アンモニアフィルタカラム	#2650L 4.0 mm I.D. × 120 mm
ガードカラム	#2619 4.0 mm I.D. × 5 mm
溶離液	4液（クエン酸Na緩衝液3液、再生液1液）
流量	0.4 mL/min
カラム温度	57°
反応液	2液（ホウ酸緩衝液-次亜塩素酸Na）（OPA溶液）
反応液流量	0.65 mL/min、0.4 mL/min
反応温度	57°
検出波長	FL Ex 340nm、Em 450 nm
注入量	20 µL