HPLC Chromaster（クロムマスター）
-アミノ酸分析の紹介（Chromaster OPAポストカラム生体液分析法）-
AS/LC-010では日立アミノ酸分析システム（OPAポストカラム法）として、タンパク質やペプチドを構成するアミノ酸約20種類を対象とした「標準分析法」を紹介しました。今回は遊離アミノ酸約40成分を対象とした「生体液分析法」を紹介いたします。標準分析法とは使用するカラムと溶離液が異なります。誘導体化試薬には、オルトフタルアルデヒド（OPA＊1）を用いています。OPAは蛍光誘導体化試薬で、感度が高いことが特長です。その半面、試薬の寿命が短く、使用する水の純度にも気を配る必要があります。
*1 ：OPA：オルトフタルアルデヒド（o-phthalaldehyde）
アミノ酸分析法の種類と特徴：
アミノ酸分析システム（OPAポストカラム法）
アミノ酸標準試料測定例
生体液分析法測定条件：
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カラム |
#2622PH 4.0 mm I.D. × 60 mm |
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アンモニアフィルタカラム |
#2650L 4.0 mm I.D. × 60 mm |
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ガードカラム |
#2619 4.0 mm I.D. × 5 mm |
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溶離液 |
4液（クエン酸Li 緩衝液3液、再生液1液） |
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流量 |
0.35 mL/min |
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カラム温度 |
38℃ |
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反応液 |
2液（ホウ酸緩衝液-次亜塩素酸Na）（OPA溶液） |
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反応液流量 |
0.55 mL/min、0.35 mL/min |
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反応温度 |
38℃ |
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検出波長 |
FL Ex 340 nm、Em 450 nm |
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注入量 |
20 µL |
食品中のアミノ酸測定例
試料の前処理：
試料の前処理：
試料の前処理：
食品などタンパク質を含む試料は、前処理として除タンパクが必要です。ここではトリクロロ酢酸を使用して除タンパクしました。
試料の前処理：
培地中のアミノ酸測定例
試料の前処理：
アミノ酸成分名一覧：
| P-Ser | Phosphoserine | Ala | Alanine | GABA | γ-Amino-n-butyric acid |
| Tau | Taurine | α-ABA | α-Amino-n-butyric acid | AlloHylys | Allohydroxylysine |
| PEA | Phosphoethanolamine | Cit | Citrulline | Hylys | Hydroxylysine |
| Asp | Aspartic acid | Val | Valine | Orn | Ornithine |
| Hypro | Hydroxyproline | Cys | Cystine | Lys | Lysine |
| Thr | Threonine | Met | Methionine | 1Mehis | 1-Methylhistidine |
| Ser | Serine | Cysthi | Cystathionine | His | Histidine |
| AspNH2 | Asparagine | Ile | Isoleucine | Trp | Tryptophan |
| Glu | Glutamicacid | Leu | Leucine | 3Mehis | 3-Methylhistidine |
| GluNH2 | Glutamine | Tyr | Tyrosine | Ans | Anserine |
| Sar | Sarcosine | β-Ala | β-Alanine | Car | Carnosine |
| α-AAA | α.Aminoadipicacid | Phe | Phenylalanine | Arg | Arginine |
| Pro | Proline | β-AiBA | β-Amino isobutyric acid | ||
| Gly | Glycine | EtOHNH2 | Ethanolamine |
本条件では、反応温度が低いため、Hypro、Proの感度が十分ではありません。また、すべての成分を完全に分離することはできません。
より高分離・高精度な分析が必要な場合は、L-8900形日立高速アミノ酸分析計をお勧めします。
注意：本掲載データは測定例を示すもので、数値を保証するものではありません。
本製品は研究用です。診断用ではありません。
